半岛·体育(中国)官方网站-最新APP下载



技术支持

293细胞培养常见问题
培养基/营养添加剂/细胞因子可否在紫外线下存放?

       不可以进行紫外照射,在紫外照射下,部分营养添加剂/细胞因子中蛋白成分会出现结构改变,降低使用效果或对细胞产生毒性;培养基经紫外线照射,其中营养成分可能发生改变,如某些氨基酸发生化学活化,对细胞产生毒性,影响细胞正常生长。

培养基从4℃冰箱取出需要37℃预热后再使用吗?

     不需要,珠海半岛体育开发的无血清细胞培养基系列均不需要提前预热,4℃冰箱中取出即可直接使用,不会对细胞造成损害导致大面积死亡。

细胞从一种培养液换成另一种培养液,细胞为什么会出现结团、细胞生长速度减缓、密度及蛋白表达量不高等现象?

珠海半岛体育开发的无血清化学限定培养液采用自主研发配方,且不含抗结团剂及其它蛋白添加因子,所提供的细胞生长环境与其它品牌产品明显不同,因此在更换培养液时细胞容易出现短暂的不适应现象。用户在更换使用珠海半岛体育培养液时若出现上述现象,可将新、旧培养液混合后使用并逐步减低原来培养液体积比例,待细胞完全过渡到新培养液后,让细胞在新的培养液中持续传代数周时间,等细胞的生长速度及密度恢复至正常状态再做下一步的实验。在此期间,我们会安排技术人员及时解答用户所遇到的问题,确保细胞培养的成功。

细胞传代培养时所需注意的主要事项有哪些?

细胞传代培养时需要注意选择细胞的传代接种密度、传代时机以及密切关注细胞活率等事项。以珠海半岛体育驯化筛选的HEK293为例,此细胞生长周期为9~10天,传代时细胞接种密度为0.3~0.5×106个/毫升,细胞传代最佳时期是细胞正处于指数增长期,此时细胞活率应在98%以上,细胞密度为4~6×106个/毫升(即培养三到四天进行传代)。传代培养过程中要密切注意细胞的活率状态,若活率下降,需先检查各个培养条件是否发生了变化,若无,则对细胞进行离心处理,在小体积摇瓶中传代培养,待细胞状态恢复后再进行下一步实验。

细胞冻存和复苏有哪些注意事项?

进行细胞种子保存时,请按说明书中推荐的细胞冻存密度将细胞离心,再加入珠海半岛体育自主研发的无血清细胞冻存液,而后依次放置于-80℃冰箱和液氮罐保存。细胞复苏时不需要对融化后的细胞进行离心除去细胞冻存液这一步操作,直接将细胞转移到小体积摇瓶进行悬浮培养,待细胞恢复三至四天后进行传代,细胞活率恢复后再进行后续实验,避免造成对后续实验的影响。

腺病毒转染常见问题
如何确定腺病毒添加量?

因为不同来源的腺病毒的MOI值不同,所以在正式实验前,可进行最佳MOI值的摸索,设计预实验以确定细胞中加入的病毒数(MOI值的摸索可参照珠海半岛体育《腺病毒扩增系统操作指南》)

腺病毒转导后多长时间可以收样?

病毒转导后的收样时间因细胞来源不同而略有差异。经多次用珠海半岛体育所优化的HEK293细胞进行实验测试,病毒的感染时间为48h所产生的腺病毒滴度最高,过长的感染时间会导致滴度降低。

质粒转染常见问题
细胞转染24小时后活率大幅下降?

通常情况下细胞转染之后活率不会有太大的降低,若出现细胞活率急剧下降,首先检查培养条件是否有误,其次需检查所使用的转染试剂量是否过量,过量的转染试剂或者转染复合物都会导致活率下降。

细胞转染后应在何时收样?

经多次验证,使用珠海半岛体育的293细胞瞬时转染系统,其最佳收样时间为转染后的第六天,但由于用户表达的蛋白大小及性质不尽相同,导致细胞转染后存活时间长短不一,因此收样时间应视情况而定,建议收样时细胞活率不要低于70%。

CHO细胞培养常见问题
培养基从4℃冰箱取出需要37℃预热后再使用吗?

     不需要,珠海半岛体育开发的无血清细胞培养基系列均不需要提前预热,4℃冰箱中取出即可直接使用,不会对细胞造成损害导致大面积死亡。

培养基/营养添加剂/细胞因子可否在紫外线下存放?

       不可以进行紫外照射,在紫外照射下,部分营养添加剂/细胞因子中蛋白成分会出现结构改变,降低使用效果或对细胞产生毒性;培养基经紫外线照射,其中营养成分可能发生改变,如某些氨基酸发生化学活化,对细胞产生毒性,影响细胞正常生长。

细胞从其它品牌培养液换成珠海半岛体育的培养液时为什么会出现结团、生长速度减缓、密度及蛋白表达量不高等现象?

珠海半岛体育开发的无血清化学限定培养液采用自主研发配方,且不含抗结团剂及其它添加因子,所提供的细胞生长环境与其它产品明显不同,因此在更换培养液时细胞容易出现短暂的不适应现象。用户在更换培养液时若出现细胞结团现象,可在培养液中添加适量抗结团剂(如硫酸葡聚糖)以消除细胞结团现象。若出现细胞生长速度减缓等其它现象,可将新、旧培养液混合使用并逐步减低原来培养液体积比例,待完全过渡到新培养液后,让细胞在新的培养液中持续传代数周时间以后再进行蛋白表达实验。在此期间,我们会安排技术人员及时解答用户所遇到的问题,确保细胞培养的成功。

细胞传代培养时所需注意的主要事项有哪些?

以珠海半岛体育驯化筛选的CHO-K1为例,该细胞生长周期为9~10天,传代时,细胞接种密度为0.3×106个/毫升,细胞传代最佳时机是细胞正处于指数增长期,此时细胞活率应在98%以上,细胞密度在4~6×106个/毫升(即培养三到四天进行传代)。

传代培养过程中要密切注意细胞的活率状态,若活率下降,需先检查各个培养条件是否发生了变化,若无,则对细胞进行离心处理,在小规格摇瓶中传代培养,待细胞状态恢复后再进行下一步实验。

细胞冻存与复苏?

进行细胞种子保存时,请按说明书中推荐的细胞冻存密度将细胞离心,再加入珠海半岛体育自主研发的无血清细胞冻存液,而后依次放置于-80℃冰箱和液氮罐保存。细胞复苏时不需要对融化后的细胞进行离心除去细胞冻存液这一步操作,直接将细胞转移到小规格摇瓶进行悬浮培养,待细胞恢复三至四天后进行传代,细胞活率恢复后再进行后续实验,避免造成对后续实验的影响。

CHO-K1-Hi细胞转染常见问题
转染后发现细胞挂壁

因本系统使用的方法为高细胞密度转染,在20×106个/ml密度条件下培养可能会出现轻微挂壁情况,这属于正常情况,可继续进行下一步操作。

转染后细胞出现结团

若转染后出现松散的细胞结团现象,可能是细胞成团粘附于瓶壁上并在震动中脱落下来所致,这种情况多数是摇瓶本身不干净或细胞存活率低而引起。在转染后,若转染后细胞结团现象比较严重,可在转染1天后加入适量抗结团剂(例如25mg/L左右的硫酸葡聚糖),以缓解或消除细胞结团。

转染后多长时间可以收样?

多数蛋白的合成在转染后第7天左右可达到最高值,通常收样时间可选择在转染后的第6-7天,具体收样时间可根据转染后的细胞活率来确定,一般建议在细胞活率大于70%时收样。

杂交瘤细胞培养常见问题
细胞减血清摇瓶培养扩增过程中应注意什么?

 杂交瘤细胞一般可以直接从静置培养转换到摇瓶悬浮震荡培养,在此过程中细胞需要先通过静置培养逐级扩增,当细胞数量较多时再进行悬浮震荡培养。细胞接种到摇瓶时请将培养液切换成KD-Hybri,此时培养基血清含量可降至2%。

细胞一换到无血清培养液后活率明显下降?

进行无血清驯化时必须保证细胞状态良好,细胞活率在85%以上时方可进行。切换成无血清培养后细胞一开始活率下降是细胞正在适应无血清环境的正常现象,此时需重点监测细胞后续是否有增殖、活率是否在逐渐回升。若细胞活率低于50%应补回2%血清,传代2-3代,待细胞状态恢复后再进行无血清驯化。

细胞已经适应无血清生长,但是无抗体表达?

杂交瘤细胞稳定性较差,无血清持续驯化过程中可能会引起阳性细胞丢失,若遇到这种情况可通过对细胞进行多次单克隆以提高其阳性特性。

细胞培养数代后生长速率明显变缓?

细胞传代要及时并选择对数生长期进行传代。不同克隆的杂交瘤细胞生长速率不同,对无血清培养系统适应能力不同,最高生长密度也会有不同。